Что такое аминотрансферазы и как определяется активность аминотрансфераз

Трансаминазы АлАт и АсАт: что это такое, нормальные уровни в анализе крови и патологическое повышение

На бланке результатов биохимического анализа крови есть подпункты «трансаминазы» — АЛТ (АлАт) и АСТ (АсАт), но знаете ли вы, что это такое, каковы эти показатели в норме и что означают их отклонения от нормального уровня?

Рассмотрим возможные нарушения в организме, которые могут быть обнаружены благодаря этим показателям биохимии.


Реакция трансаминирования — это процесс переноса аминогруппы от молекулы аминокислоты к молекуле альфа-кетокислоты. В процессе реакции не образуется свободный аммиак.

Норма

Исследование плазмы крови позволяет выявить АСТ и АЛТ, в последующем полученные результаты сравнивают с показателями, которые присущи здоровому человеку. Для мужчин норма АЛТ до 45 Ед/л, АСТ – до 47 Ед/л. Для женщин АЛТ в норме составляет до 34 Ед/л, АСТ – до 31 Ед/л.

Норма рассчитывается по-разному, поскольку все зависит от лаборатории, используемого оборудования для диагностики. На бланках указываются референсные значения.

Этот коэффициент получил название в честь Фернандо де Ритиса, который с помощью своих исследований доказал, что имеется определенная корреляция между аминотрансаминазами и разновидностью заболеваний печени.

Что такое трансаминазы

Трансаминазы — внутриклеточные ферменты, осуществляющие каталитическое трансаминирование — перенос аминогруппы (NH2) между молекулой аминокислоты к молекулой α-кетокислоты без промежуточного образования аммиака. Тем самым осуществляется взаимосвязь обмена азотистых соединений с углеводным обменом.

Термин “трансаминазы” сейчас считается устаревшим. Новое название — “аминотрансферазы”. Тем не менее в медицинской практике старое название прочно удерживает свои позиции.

Трансаминазы присутствуют во всех без исключения клетках, начиная от бактерий и заканчивая высшими многоклеточными организмами.

Трансаминазы специализируются на трансаминировании какой-либо одной аминокислоты или группе сходных по строению аминокислот. Аминотрансферазы именуют по названию аминокислоты, участвующей в реакции трансаминирования. Так, аланинаминотрансфераза (АЛТ, АлАТ) предназначена для аминокислоты аланина, аспартатаминотрансфераза (АСТ, АсАТ) — для аспарагиновой кислоты, глутаминатаминотрансфераза — для глутаминовой кислоты и т. д. В качестве реципиента аминогруппы может выступать α-кетоглутаровая, пировиноградная кислоты и др.

Реакция трансаминирования происходит при участии кофермента — витамина B6, или пиридоксина. Витамин B6 в форме пиридоксальфосфата составляет с аминотрансферазой единый комплекс “фермент-кофермент”.

Реакция трансаминирования происходит при участии кофермента — витамина B6, или пиридоксина. Витамин B6 в форме пиридоксальфосфата составляет с аминотрансферазой единый комплекс “фермент-кофермент”.

Аспарагиновая трансаминаза

Как и АЛТ, аспартатаминотрансфераза синтезируется в клетках различных тканей организма, при повреждении которых следует ожидать, что она будет повышена в крови при заболеваниях. В отличие от АЛТ, АСТ содержится не только в цитозолях, но и митохондриях (миниатюрные энергетические «станции») следующих органов:

  • Миокард (содержание АСТ в организме – 1166 Ед/г белка);
  • Головной мозг (1230 Ед/г белка);
  • Печень (612 Ед/г белка);
  • Скелетные мышцы (357 Ед/г белка);
  • Почки (265 Ед/г белка);
  • Поджелудочная железа (86 Ед/г белка);
  • Легкие (18 Ед/г белка);
  • Форменные элементы крови: эритроциты, лейкоциты (в минимальном количестве).


Печеночные трансаминазы у детей и мужчин имеют более высокие показатели в норме. Ребенок постоянно растет, то есть процессы анаболизма повышенные. А представители сильного пола к тому же имеют большую мышечную массу.

Расшифровка результатов анализа на АлАт

На точность результатов анализов влияет несколько факторов – изменение уровня аланин-аминотрансферазы могут вызвать некоторые продукты, стресс, некоторые лекарственные средства, физические нагрузки. Чтобы данные были максимально точными, перед сдачей анализов следует соблюдать простые правила. Кровь сдают натощак, как минимум через 12 часов с момента последнего приема пищи. Непосредственно перед анализом следует провести 30-40 минут в полном покое, исключив физические и эмоциональные нагрузки. И, наконец, в день анализа не рекомендуется курить.

Определения аминотрансфераз в крови

Аминотрансферазы: аспартат- и аланинаминотрансферазы осуществляют весьма важную функцию – обратимый перенос аминогрупп с аминонокислот на кетокислоты. Содержатся во всех клетках человеческого организма (больше всего в ткани печени, мышцах сердца, скелетной мускулатуры, почках). Активность АсАТ преобладает в мышечной ткани, а АлАТ – в печени.

Наиболее часто активность аминотрансфераз исследуют с целью дифференциальной диагностики патологии печени и миокарда. Для этого определяют показатель, который называется коэффициент де Ритиса:

КдР = АсАТ / АлАТ = 1,33.

Увеличение активности аминотрансфераз наблюдается при:

· Инфаркте миокарда активность АсАТ в 95% случаев повышается (активность КК, ЛДГ при этом повышена). Возрастание происходит на 4-6 ч. с момента приступа. Оно четко выражено спустя 24-36 ч. (увеличивается в 4-5 раз выше нормы) и лишь на 3-7 сутки снижается до нормы. Отношение показателей активностей КК/АсАТ имеет высокую значимость при дифференциальной диагностике инфаркта миокарда(отношение около 5) и поражениях скелетных мышц (около 27). Коэффициент де Ритиса АсАТ/АлАТ более 1.

· Остром вирусном гепатите (АлАТ и АсАТ более чем в 100 раз). Коэффициент де Ритиса менее 1,33.

Быстрое снижение активности аминотрансфераз одновременно с возрастанием гипербилирубинемии свидетельствует об обширных некротических изменениях в ткани печени. В благоприятных ситуациях гепатита активность данных ферментов снижается медленно в течение нескольких недель и даже месяцев.

· Циррозе печени (активность повышается в 5-8 раз);

· Механической желтухе (АлАТ повышается в 50 раз долго остается повышенной, сопровождаясь возрастанием активности ЩФ, ГГТП и содержанием билирубина);

· Токсическом поражении печени;

· Легочной эмболии (активность КК при этом не повышена);

· Пораженияхмышц (мышечной дистрофии, дерматоитозит);

Снижение активности АсАТ и АлАТ наблюдаются при:

· Снижении содержания в организме витамина В6.

Ответьте на вопросы:

1. К какому классу ферментов относятся АлАТ и АсАТ?

2. Назовите место локализации АлАТ и АсАТ.

3. Что такое коэффициент де Ритиса, как его рассчитывают, что он характеризует.

4. Назовите основные заболевания, при которых изменяется активность аминотрансфераз. Объясните причину.

5. *Напишите уравнение реакции, которую катализирует АлАТ.

6. *Назовите, какие еще ферменты изменяют свою активность при заболеваниях сердца; печени?

Практическая работа

«Определение активности кислой и щелочной фосфатаз

в сыворотке крови».

Цели практической работы:

· закрепить знания об изоферментах и клинико-диагностическое значении определения фосфатаз в сыворотке крови;

· научиться определять активность кислой щелочной фосфатазы в сыворотке крови.

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

5. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

6. Сделайте вывод по работе и рисунки.

7. Ответьте на дополнительные вопросы.

Принцип:

Определение активности фосфатаз основано на способности ферментов, отщеплять неорганический фосфат от нитрофенил-фосфата в щелочной среде.

Реактивы. 1. Буфер, рН=10,4. 2. 4-нитрофенилфосфат. 3. NaOH 0.4 ммоль/л 4. Сыворотка.Оборудование. 1. ФЭК, кювета на 10 мм. 2. Термостат. 3. Пробирки – 2 шт. 4. Пипетки на 1 и 5 мл. 5. Дозатор 0,02 мл

Ход определения:

Провести исследование активности фосфатаз согласно таблице.

Реактив.Опыт, мл.Контроль, мл.
Рабочий реактив.1,001,00
Сыворотка.0,02
Перемешать, проинкубировать в течение 20 минут при 30 0 С в термостате.
NaOH5,005,00

Перемешать и измерить оптическую плотность опыта (Ео) против контроля в кюветах на 10 мм, при длине волны 405 нм.

Расчет результатов проводим по формуле:

ЩФ, = Ео * 812 (МЕ/л).

Нормаактивности фосфатаз в сыворотке крови 30 –90 МЕ/л.

Задания для самостоятельной работы:

Значение в диагностике

Для определения характеристик патологии печени согласно уровню гиперферментемии используют специальную шкалу. Степень повышения печёночных трансаминаз делится как:

  1. Умеренная (до 1–1,5 норм или в 1–1,5 раз).
  2. Средняя (от 6 до 10 норм или в 6–10 раз).
  3. Высокая (более 10–20 норм или более чем в 10 раз).

Пик активности трансаминаз при острых вирусных гепатитах наблюдается на второй – третьей неделе заболевания, после чего снижается до нормы значений АЛТ и АСТ в течение 30–35 суток.

При хроническом течении вне обострения гиперферментемия не характеризуется резкими колебаниями, и остаётся в пределах умеренного или незначительного повышения. В латентной (бессимптомной) фазе цирроза печени трансаминазы чаще всего находятся в пределах нормы.

Важно обращать внимание, повышены печёночные трансаминазы изолированно или в сочетании с другими показателями биохимического спектра: билирубином, гамма-глутамилтранспептидазой, щелочной фосфатазой, поскольку комбинация роста показателей указывает на конкретную патологию или сужает круг вероятных причин.

Так, повышенные трансаминазы выявляются у носителей гепатита В, несмотря на отсутствие симптомов.

Подпечёночная (механическая) желтуха, острая печёночная недостаточность может сопровождаться ростом уровня билирубина при одновременной нормальной или пониженной концентрации АСТ и АЛТ. Это явление называется билирубин-аминотрансферазной диссоциацией.

Увеличение трансаминаз у детей часто обусловлено инфицированием вирусом гепатита, лекарственным поражением печени. Опасной патологией, встречающейся в детском возрасте, является синдром Рея. В результате употребления ацетилсалициловой кислоты (аспирина) развивается острая печёночная энцефалопатия – состояние, угрожающее жизни.

С целью углублённой диагностики пользуются коэффициентом де Ритиса, который представляет собой соотношение показателей трансаминаз АСТ и АЛТ. В норме равен 1,33. Если коэффициент де Ритиса менее 1, это расценивают как признак инфекционно-воспалительного поражения печени.

Читайте также:  Причины повышения и понижения температуры при ВСД у взрослых и детей. Особенности терморегуляции при дистонии

Для острых вирусных гепатитов, например, он составляет 0,55–0,83. Достижение уровня, равного 2 и выше, позволяет говорить о предположительном алкогольном гепатите или некрозе сердечной мышцы.


Современные методы диагностики фиброза и цирроза.

Анализы > Определение активности аминотрансфераз (АсАТ и АлАТ) в крови

С какой целью проводят исследование аминотрансфераз?

Аминотрасферазы представляют собой ферменты, катализирующие течение биохимических реакций. Являясь внутриклеточными структурами, они ускоряют перенос химических групп между веществами в клетках. Аминотрансферазы участвуют в реакциях образования и распада аминокислот и углеводов, то есть в жизненно важных процессах в организме. Одной из составляющих всех аминотрансфераз является витамин В6.

В клинической практике наибольшее распространение получило определение уровня аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) в крови.

Концентрация ферментов в различных органах и тканях организма неодинакова. Высокие значения содержания АсАТ определяются в сердце, мышцах, печени, несколько ниже они в поджелудочной железе, селезенке. Большие концентрации АлАТ характерны для печени и почек, меньшие – для сердца, скелетных мышц, поджелудочной железы.

АсАТ и АлАТ находятся в крови в незначительных количествах. При повреждении органов ферменты выходят в кровяное русло, и тогда их уровень там возрастает. На этом основан метод определения АсАТ и АлАТ в сыворотке крови.

В каких случаях проводят определение содержания АсАТ и АлАТ?

Уровень этих ферментов в крови может и понижаться, и повышаться.

Сниженные концентрации обоих ферментов наблюдаются при значительных поражениях клеток синтезирующих их органов или недостатке в организме витамина В6.

Повышение уровня АсАТ в крови выявляют при заболеваниях сердца (нарастающей ишемии, инфаркте миокарда, миокардите) и травмах (ушибах, повреждениях, кардиохирургических вмешательствах). Высокий уровень АсАТ характерен для патологии скелетной мускулатуры (ее повреждений, миозитов), заболеваний печени и желчевыводящих путей (гепатитов, опухолей, нарушений оттока желчи), поджелудочной железы.

Повышение уровня АлАТ происходит вследствие разрушения клеток печени при различной печеночной патологии (гепатите, циррозе, интоксикации, застое желчи), в случае обширного инфаркта миокарда, при миокардите, массивных повреждениях мышц, глубоких ожогах, остром панкреатите. Уровень АлАТ может повышаться при приеме некоторых лекарственных препаратов, оказывающих негативное воздействие на печень (психотропных веществ, антибиотиков, анаболических стероидов и др.).

Во всех этих случаях необходимо определять уровень аминотрансфераз крови.

Какие врачи назначают обследование, где можно сделать такой анализ?

Исследование аминотрансфераз крови назначают следующие врачи: терапевты, гастроэнтерологи, кардиологи, ревматологи, травматологи, хирурги, педиатры, инфекционисты.

Сделать анализ можно в биохимических лабораториях лечебных учреждений и диагностических центров.

Что является материалом для исследования, как правильно к нему подготовиться?

Материалом для исследования является венозная кровь.

Специальной подготовки не требуется. Исследуют кровь, взятую натощак, желательно в утренние часы.

Результаты в норме

В норме концентрация АсАТ и АлАТ в сыворотке крови у мужчин составляет 10–40 Ед/л, у женщин – 10–32 Ед/л.

Преимущества и недостатки метода

Для определения уровня трансаминаз в крови различные лаборатории пользуются методиками, несколько отличающимися друг от друга. По этой причине повторное определение содержания ферментов желательно проводить в том же медицинском учреждении. Интерпретировать данные полученных анализов может только врач.

Более информативным является изучение значений обеих аминотрансфераз одновременно.

Клиническое значение метода

Определение уровня аминотрансфераз в крови является важным диагностическим исследованием и помогает выявлять патологию на ранних стадиях, наблюдать за течением заболеваний, проводить их эффективное лечение.

Информация размещена на сайте только для ознакомления. Обязательно необходима консультация со специалистом.
Если вы нашли ошибку в тексте, некорректный отзыв или неправильную информацию в описании, то просим вас сообщать об этом администратору сайта.

Отзывы размещенные на данном сайте являются личным мнением лиц их написавших. Не занимайтесь самолечением!

Более информативным является изучение значений обеих аминотрансфераз одновременно.

Расшифровка АЛТ

Аlt при исследовании определяется наряду с другими трансаминазами. АСТ (аспартатаминотрансфераза) и АЛТ тесно связаны друг с другом, отклонения в параметрах этих двух индексов помогает точно определить, в каком органе имеется патология:

  1. Если alt больше ast, это означает наличие отклонений в печени.
  2. Если наблюдается повышение АСТ, то чаще всего происходит проблема в клетках сердечной мышцы.

Узнать точные показатели можно, сделав биохимический анализ крови. Расшифровка АЛТ при этом подразумевает показатель аланиновой трансаминазы в крови. Ее определяют не по количеству выброшенного фермента, а по его активности.

В здоровом организме нормой активности считается 6—37 МЕ/л (МЕ/л — это международная величина, которая определяет дозу активности того или иного вещества).

В биохимическом анализе крови АЛТ чаще всего исследуют для определения нарушений работы печени. В этом случае даже на ранних сроках возможно точное определение, в какой именно области печени имеются отклонения. Это позволяет точно определить диагноз и предсказать дальнейшее развитие болезни. Причем повышение трансаминазы может происходить бессимптомно.

Если исследование не было проведено, то первый признак повышения АЛТ будет таким же, как и при желтухе.

В случае если анализ крови производится с помощью оптического теста, то при 30° С норма составит 2-25 МЕ, у ребенка показатель будет изменен.

Аминотрансферазы

Аминотрансферазы (трансаминазы) — ферменты, катализирующие межмолекулярный перенос аминогруппы от соответствующих аминокислот на a‑кетокислоты (2‑оксокислоты) с образованием новых кето- и аминокислот без образования свободного аммиака, в качестве кофермента используется витамин В6 (пиридоксин). Эти ферменты играют центральную роль в обмене белков, осуществляя окислительное дезаминирование аминокислот опосредованно через глутаминовую кислоту. Образующаяся глутаминовая кислота дезаминируется глутаматдегидрогеназой с освобождением свободного аммиака и 2‑оксоглутаровой кислоты.

В организме человека наибольшее значение имеют две аминотрансферазы: аспартатаминотрансфераза (АСТ или АсАТ) (L‑аспартат:2‑оксоглутарат-амино­трансфераза, КФ 2.6.1.1.) и аланинаминотрансфераза (АЛТ или АлАТ), (L‑аланин:2‑оксоглутарат-аминотрансфераза, КФ 2.6.1.2.). В клинической практике чаще всего определяют именно активность этих двух ферментов. Существует также другое название указанных ферментов: для АСТ — глутамат­оксалоацетат­амино­трансфераза (ГОАТ), для АЛТ — глутамат­пируват­амино­трансфераза (ГПАТ). Ниже приведены реакции, катализируемые этими ферментами:

2-Оксоглутарат + Аспартат ↔ Глутамат + Оксалоацетат

2-Оксоглутарат + Аланин ↔ Глутамат + Пируват

Наибольшая активность АСТ обнаружена в миокарде, затем в порядке убывания в печени, скелетных мышцах, головном мозге, почках. Активность фермента в миокарде в 10000 раз выше, чем в сыворотке крови. Фермент является димером, имеет изоферменты: положительно заряженный митохондриальный с ММ=93 кД и отрицательно заряженный цитозольный с ММ=92 кД. Активность АЛТ максимальна в печени, среди других органов убывает в последовательности: поджелудочная железа, сердце, скелетные мышцы, селезенка, легкие. Фермент также имеет цитозольный и митохондриальный изоферменты, однако последний содержится в минимальном количестве и нестабилен. Избирательная тканевая локализация позволяет считать трансаминазы маркерными ферментами: АСТ для миокарда, АЛТ для печени. Соотношение активности аминотрансфераз позволяет судить о глубине повреждения клеток: АЛТ преимущественно локализована в цитоплазме, АСТ — в цитоплазме и в митохондриях.

Существующие методы определения активности трансаминаз в сыворотке крови можно разделить на две основные группы: колориметрические и спектрофотометрические:

1. В основе спектрофотометрических методов лежит использование оптического теста Варбурга (см выше). Эти методы являются наиболее специфичными и точными для исследования активности трансаминаз сыворотки крови, основаны на различии поглощения окисленной и восстановленной форм НАД при 340 нм и требуют постановки индикаторных реакций, в которые вовлекаются продукты основной реакции:

Оксалоацетат + НАДH ↔ Малат + НАД

Пируват + НАДH ↔ Лактат + НАД

Активность ферментов в данном случае будет выражаться в нмоль НАДH/с×л.

Аминотрансферазы (трансаминазы) — ферменты, катализирующие межмолекулярный перенос аминогруппы от соответствующих аминокислот на a‑кетокислоты (2‑оксокислоты) с образованием новых кето- и аминокислот без образования свободного аммиака, в качестве кофермента используется витамин В6 (пиридоксин). Эти ферменты играют центральную роль в обмене белков, осуществляя окислительное дезаминирование аминокислот опосредованно через глутаминовую кислоту. Образующаяся глутаминовая кислота дезаминируется глутаматдегидрогеназой с освобождением свободного аммиака и 2‑оксоглутаровой кислоты.

Определение активности аминотрансфераз.

Аспартатаминотансфераза (АсАТ) и аланинаминотрансфераза (АлАТ) – близкие по действию ферменты, при участии которых в организме человека осуществляется межмолекулярный перенос аминогрупп с аминокислот на кетокислоты. Этот процесс называется переаминированием. Значение переаминирования состоит в синтезе и разрушении отдельных аминокислот в организме.

Аминотрансферазы (АсАТ и АлАТ) являются внутриклеточными ферментами и их содержание в сыворотке крови здоровых людей невелико. Однако при повреждении или разрушении клеток, содержащих АсАТ и АлАТ (клеток печени, мышц сердца, скелетной мускулатуры и почек) происходит дополнительный выброс этих ферментов в кровяное русло, что приводит к повышению их активности в крови.

Максимальное количество АлАТ содержится в печени. При поражении клеток печени вирусами, различными химическими веществами, в т.ч. алкоголем и лекарствами, а также при нарушении оттока желчи из-за сдавливания желчного протока или его закупорке камнями активность АлАТ в крови возрастает. Поэтому определение активности фермента в сыворотке крови широко используется для диагностики болезней печени. Степень увеличения активности АлАТ, как правило, пропорциональна тяжести заболевания, в острых случаях активность фермента в сыворотке крови может превышать нормальные значения в 5-10 раз. При инфекционном гепатите повышение активности фермента происходит в очень ранние сроки. С увеличением сроков заболевания активность фермента обычно снижается, но медленно, в течение нескольких месяцев – при легком течении заболевания. Резкое увеличение ак­тивности АлАТ наблюдается и при безжелтушной форме заболевания, поэтому данный тест широко приме­няется при обследовании лиц, пребывающих в очаге инфекции. Исследование активности АлАТ обязательно для всех доноров крови для исключения хронических заболеваний печени.

Читайте также:  Псевдоэрозия шейки матки: что это такое, причины, симптомы, лечение

Длительно продолжающееся увеличение активности трансаминаз или повышение в поздние сроки заболевания может означать развитие массивного развитие некроза печени. Высокая активность АсАТ, превышающая активность АлАТ, предполагает обширный некроз и плохой прогноз (это происходит за счет митохондриальной АсАТ).

При рецидивах и обострении активность фермента вновь повышается. Активность АсАТ при этом также повышается, но значительно ниже, чем АлАТ. Коэффициент АсАТ/АлАТ

· Для обследования контактных в очаге инфекции;

· Как индикатор остроты и активности патологического процесса в печени;

· Для диагностики и дифференциальной диагностики заболеваний
печени;

· Критерий полноты выздоровления.

Повышение активности аминотрансфераз можно отметить и у здоровых людей, находящихся на диете, богатой белком или содержащей до 30 % сахарозы.

AсАT в большом количестве находится в клетках сердца и печени. При инфаркте миокарда увеличение активности AсАT в крови наблюдается через 6-8 часов с момента приступа, а спустя 24-36 часов она возрастает в 4-5 раз относительно верхнего предельного уровня диапазона нормальных значений. Снижение активности AсАT до нормальных значений происходит лишь через 3-7 суток. Следует отметить, что повышение активности AсАT в крови наблюдается при формах инфаркта миокарда, которые электрокардиографически выявить невозможно. Сердечная мышца содержит незначительное количество АлАТ. Поэтому уровень активности АлАТ в сыворотке крови при инфаркте миокарда обычно остается в пределах нормы.

Повышение активности AсАT в крови (также как АлАТ) происходит при многих заболеваниях печени. Однако соотношение между увеличением активностей AсАT и АлАТ при разных заболеваниях отличается, поэтому их параллельный анализ дает дополнительную информацию, используемую для постановки точного диагноза.

Снижение активности AсАT и AлАT ниже нормы встречается только при тяжёлых поражениях печени, когда значительно уменьшается количество клеток, синтезирующих эти ферменты (обширный некроз, цирроз).

Существующие методы определения активности аминотрансфераз в сыворотке крови можно разделить на две основные группы:

1. колориметрические (с остановкой реакции) и метод конечной точки

Колориметрический метод Райтмана-Френкеля (основан на образовании пируват-2,4-динитрофенилгидразона), несмотря на присущие ему недостатки, продолжает оставаться распространённым в клинико-диагностической практике. К основным недостаткам данного метода можно отнести:

1. невозможность контроля линейности реакции;

2. накопление в реакции оксалоацетата, ингибирующего аминотрансферазы;

3. необходимость построения калибровочного графика;

4. резкое увеличение адсорбции при высокой активности ферментов, затрудняющее учёт результатов;

5. длительность исполнения анализа и некоторые другие.

Принцип метода:

В результате переаминирования, происходящего под действием АлАТ и АсАТ, образуются ПВК и ЩУК. ЩУК способна в процессе ферментативной реакции превращаться в ПВК. При добавлении 2,4 динитрофенилгидрозина образуется гидразон ПВК. Гидразон ПВК в щелочной среде дает окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся ПВК.

АлАТ -0,1 – 0,68 ммоль ПВК л.ч

АсАТ – 0,1 – 0,45 ммоль ПВК л.ч

Кинетические методы. Преимущество кинетического метода состоит в возможности прямого непрерывного спектрофотометрического измерения скорости ферментативной реакции в начальной линейной части кинетической кривой; оксалоацетат удаляется по мере его образования; для расчёта активности ферментов не требуется построения калибровочного графика. Этот современный метод является высокоспецифичным, быстрым и позволяет получать более точные результаты. Во многих странах он является стандартным, референтным способом определения AсАT и АлАТ.

В основе кинетического метода определения активности аминотрансфераз лежит оптический тест Варбурга. Принцип теста основан на разнице поглощения при длине волны 340 нм восстановленной (НАДН) и окисленной (НАД) форм никотинамидаде-ниндинуклеотида. При 340 нм НАДН имеет максимальную адсорбцию, тогда как НАД при данной длине волны не имеет поглощения.

Для определения активностей аминотрансфераз используют сопряженные ферментативные реакции: основная – реакция переаминирования, катализируемая AсАT или АлАТ, и индикаторная – реакция, протекающая под воздействием вспомогательных, индикаторных ферментов, малатдегидрогеназы (МДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ).

Схема определения активности AсАT:

1. Основная реакция:

L-аспартат + α-кетоглутарат оксалоацетат + L-глутамат

2. Индикаторная реакция

оксалоацетат + НАДН L-малат + НАД

Схема определения активности АлАТ:

1. Основная реакция

L-аланин + α-кетоглутарат пируват + L-глутамат

2. Индикаторная реакция

пируват + НАДН L-малат + НАД

В результате окисления НАДН происходит уменьшение оптической плотности при длине волны 340 нм. Снижение оптической плотности отражает активность AсАT и АлАТ. Для расчета активности ферментов используется коэффициент молярной экстинкции НАДН.

Аминотрансферазы (АсАТ и АлАТ) являются внутриклеточными ферментами и их содержание в сыворотке крови здоровых людей невелико. Однако при повреждении или разрушении клеток, содержащих АсАТ и АлАТ (клеток печени, мышц сердца, скелетной мускулатуры и почек) происходит дополнительный выброс этих ферментов в кровяное русло, что приводит к повышению их активности в крови.

Определение трансаминаз в сыворотке крови. Принцип метода, диагностическое значение.

Общая схема источников и путей расходования аминокислот в тканях. Экзогенный и эндогенный пул аминокислот

Фонд свободных аминокислот организма составляет примерно 35 г. Содержание свободных аминокислот в крови в среднем равно 35-65 мг/дл. Большая часть аминокислот входит в состав белков, количество которых в организме взрослого человека нормального телосложения составляет примерно 15 кг.

Источники свободных аминокислот в клетках – белки пищи, собственные белки тканей и синтез аминокислот из углеводов. Многие клетки, за исключением высокоспециализированных (например, эритроцитов), используют аминокислоты для синтеза белков, а также большого количества других веществ: фосфолипидов мембран, гема, пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов, биогенных аминов (катехоламинов, гистамина) и других соединений.

Какой-либо специальной формы депонирования аминокислот, подобно глюкозе или жирных кислот, не существует. Поэтому резервом аминокислот могут служить все функциональные и структурные белки тканей, но преимущественно белки мышц, поскольку их больше, чем всех остальных.

В организме человека в сутки распадается на аминокислоты около 400 г белков, примерно такое же количество синтезируется. Поэтому тканевые белки не могут восполнять затраты аминокислот при их катаболизме и использовании на синтез других веществ. Первичными источниками аминокислот не могут служить и углеводы, так как из них синтезируются только углеродная часть молекулы большинства аминокислот, а аминогруппа поступает от других аминокислот. Следовательно, основным источником аминокислот организма служат белки пищи.

Общие пути катаболизма аминокислот в тканях.

Общие пути превращения аминокислот включает реакции дезаминирования, трансаминирования и декарбоксилирования.

Трансаминирование, химизм. Трансаминазы, их специфичность. Роль витамина В6 в трансаминировании. Биологическая роль реакций транс- аминирования.

Трансаминирование есть подразумевают реакции межмолекулярного переноса аминогруппы от аминокислоты на альфа-кетокислоту без промежуточного образования аммиака.

Реакция трансаминирования являются обратимыми и универсальными для всех жиых организмо. Эти реакции протекают при участии специфических ферментов, аминотрансферазы или трансаминазы.

Аминотрансферазы обладают субстратной специфичностью к разным аминокислотам. В тканях человека более 10 разных аминотрансфераз.
Топовые ферменты.
– аланиаминотрансфераза (АЛТ);
– глутамат-пируватаминотрансфераза (ГПТ);
– аспартатаминотрансфераза (АСТ);
– по обратной реакции глутама-оксалоацетатаминотрансфераза (ГОТ).

В переносе аминогруппы активное участие принимает кофермент трансаминаз пиридоксальфосфат, производное витамина В6, который процессе реакции обратимо превращается в пиридоксаминфосфат.

Биологическая роль – ОЧЕНЬ важная. Трансаминирование есть заключительный этап синтеза заменимых аминокислот из соответствующих альфа-кетокислот, если они НУЖНЫ, НЕОБХОДИМЫ клеткам в данных момент. Также трансаминирование это первая стадия дезаминирования большинства аминокислот, т.е. начальный этап их катаболизма. Общее число аминокислот в лектке не меняется.

Определение трансаминаз в сыворотке крови. Принцип метода, диагностическое значение.

Ладно, это есть в методичке, но краткий пересказ предыдущих эпизодов.
Аминотрансферазы – ферменты, катализирующие межмолекулярный перенос аминогруппы с аминокислоты на кетокислоту. Наибольшее значение имеет определение активности 2-х ферментов: аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ). Их много, они везде.

Всего капитально два метода:
1. С использованием стандартных реактивов. В результате реакции пировиноградной кислоты получается. субстанция коричневого-фиолетового цвета.
2. Унифицированный метод.
– Определение активности аспартатаминотрансферазы.
Основан на определении скорости образования НАД за счет окисления НАД+Н. В результате реакции уменьшается оптическая плотность растора.
– Определение активности аспартатаминотрансферазы.
Основан на определении скорости образования НАД за счет окисления НАД+Н. В результате реакции уменьшается оптическая плотность растора.

Диагностическое значение:
Определение активности АсАТ и АлАТ широко используется для диагностики болезней печени и заболеваний сердца.
Актиность АлАТ увеличивается при обострении хронического гепатита, при токсическом поражение сердца.
Активность АсАТ возрастанет при гипертонических кризах, инфарктах.

Дата добавления: 2018-05-02 ; просмотров: 2724 ;

Общие пути катаболизма аминокислот в тканях.

Анализы > Определение активности аминотрансфераз (АсАТ и АлАТ) в крови

С какой целью проводят исследование аминотрансфераз?

Аминотрасферазы представляют собой ферменты, катализирующие течение биохимических реакций. Являясь внутриклеточными структурами, они ускоряют перенос химических групп между веществами в клетках. Аминотрансферазы участвуют в реакциях образования и распада аминокислот и углеводов, то есть в жизненно важных процессах в организме. Одной из составляющих всех аминотрансфераз является витамин В6.

Читайте также:  Правила выполнения лечебного комплекса при компрессионном переломе позвоночника

В клинической практике наибольшее распространение получило определение уровня аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) в крови.

Концентрация ферментов в различных органах и тканях организма неодинакова. Высокие значения содержания АсАТ определяются в сердце, мышцах, печени, несколько ниже они в поджелудочной железе, селезенке. Большие концентрации АлАТ характерны для печени и почек, меньшие – для сердца, скелетных мышц, поджелудочной железы.

АсАТ и АлАТ находятся в крови в незначительных количествах. При повреждении органов ферменты выходят в кровяное русло, и тогда их уровень там возрастает. На этом основан метод определения АсАТ и АлАТ в сыворотке крови.

В каких случаях проводят определение содержания АсАТ и АлАТ?

Уровень этих ферментов в крови может и понижаться, и повышаться.

Сниженные концентрации обоих ферментов наблюдаются при значительных поражениях клеток синтезирующих их органов или недостатке в организме витамина В6.

Повышение уровня АсАТ в крови выявляют при заболеваниях сердца (нарастающей ишемии, инфаркте миокарда, миокардите) и травмах (ушибах, повреждениях, кардиохирургических вмешательствах). Высокий уровень АсАТ характерен для патологии скелетной мускулатуры (ее повреждений, миозитов), заболеваний печени и желчевыводящих путей (гепатитов, опухолей, нарушений оттока желчи), поджелудочной железы.

Повышение уровня АлАТ происходит вследствие разрушения клеток печени при различной печеночной патологии (гепатите, циррозе, интоксикации, застое желчи), в случае обширного инфаркта миокарда, при миокардите, массивных повреждениях мышц, глубоких ожогах, остром панкреатите. Уровень АлАТ может повышаться при приеме некоторых лекарственных препаратов, оказывающих негативное воздействие на печень (психотропных веществ, антибиотиков, анаболических стероидов и др.).

Во всех этих случаях необходимо определять уровень аминотрансфераз крови.

Какие врачи назначают обследование, где можно сделать такой анализ?

Исследование аминотрансфераз крови назначают следующие врачи: терапевты, гастроэнтерологи, кардиологи, ревматологи, травматологи, хирурги, педиатры, инфекционисты.

Сделать анализ можно в биохимических лабораториях лечебных учреждений и диагностических центров.

Что является материалом для исследования, как правильно к нему подготовиться?

Материалом для исследования является венозная кровь.

Специальной подготовки не требуется. Исследуют кровь, взятую натощак, желательно в утренние часы.

Результаты в норме

В норме концентрация АсАТ и АлАТ в сыворотке крови у мужчин составляет 10–40 Ед/л, у женщин – 10–32 Ед/л.

Преимущества и недостатки метода

Для определения уровня трансаминаз в крови различные лаборатории пользуются методиками, несколько отличающимися друг от друга. По этой причине повторное определение содержания ферментов желательно проводить в том же медицинском учреждении. Интерпретировать данные полученных анализов может только врач.

Более информативным является изучение значений обеих аминотрансфераз одновременно.

Клиническое значение метода

Определение уровня аминотрансфераз в крови является важным диагностическим исследованием и помогает выявлять патологию на ранних стадиях, наблюдать за течением заболеваний, проводить их эффективное лечение.

Информация размещена на сайте только для ознакомления. Обязательно необходима консультация со специалистом.
Если вы нашли ошибку в тексте, некорректный отзыв или неправильную информацию в описании, то просим вас сообщать об этом администратору сайта.

Отзывы размещенные на данном сайте являются личным мнением лиц их написавших. Не занимайтесь самолечением!

Концентрация ферментов в различных органах и тканях организма неодинакова. Высокие значения содержания АсАТ определяются в сердце, мышцах, печени, несколько ниже они в поджелудочной железе, селезенке. Большие концентрации АлАТ характерны для печени и почек, меньшие – для сердца, скелетных мышц, поджелудочной железы.

Печеночные трансаминазы

Трансаминазы печени позволяют выявлять самые разные заболевания.

Однако их повышение не всегда свидетельствует о каком-либо патологическом процессе, происходящем в организме.

  1. Трансминазы — что это такое?
  2. Нормальные показатели
  3. Отклонения от норм и степень тяжести поражений
  4. Причины отклонений от нормы


Итак, печеночные трансаминазы — что это такое и что на что влияет данный показатель?

Аминотрансферазы

I Аминотрансфера́зы (синоним трансаминазы)

ферменты, катализирующие реакцию переноса аминогруппы (NH2-группы) вместе с протоном (ионом водорода) и парой электронов от аминокислот или аминов к кетокислотам или другим соединениям, содержащим в составе своей молекулы карбонильную группу (СО-группу). Биологическую роль А. чрезвычайно велика, т.к. они участвуют в трансаминировании — процессе, имеющем важнейшее значение для энергетического обмена (см. Гликолиз, Дыхание тканевое) и азотистого обмена (Азотистый обмен).Установлено, что любые состояния, требующие срочной мобилизации компонентов белка для покрытия энергетических нужд организма (недостаточное или несбалансированное питание, все виды стресса и т.п.), связаны с адаптивным, гормонально-стимулируемым биосинтезом определенных А., прежде всего А., участвующих в глюконеогенезе (аланин- и аспартат-аминотрансфераз, аминотрансфераз ароматических аминокислот). Генетически обусловленная недостаточность некоторых А. лежит в основе патогенеза ряда наследственных болезней. Так, своеобразная форма прогрессирующей кольцевидной дистрофии сосудистой оболочки и сетчатки (хориоретинопатия) вызывается недостаточностью орнитин-оксокислота — аминотрансферазы. Наследственный дефект или подавление при гиповитаминозе В6 аминобутират-аминотрансферазы (трансаминазы γ-аминомасляной кислоты) является одной из основных причин нарушения деятельности ц.н.с. при этой патологии.

Содержание некоторых аминотрансфераз в крови является важным диагностическим признаком ряда заболеваний. Наибольшее клинико-диагностическое значение имеют аспартат-аминотрансфераза (АсАТ) и аланин-аминотрансфераза (АлАТ). Повышение активности этих А. в крови позволяет распознавать патологические состояния, сопровождающиеся некрозом тканей. Так, при инфаркте миокарда активность АсАТ в крови резко возрастает (в 5—10 раз по сравнению с нормой) через 4—6 ч после начала заболевания, а затем постепенно снижается, достигая нормы примерно через 5 дней (в среднем на 3—7-й день). Повторное повышение активности АсАТ в крови говорит о продолжающемся процессе некротического распада ткани миокарда. При разрушении мышечной ткани (например, вследствие травмы) в крови возрастает активность как АсАТ, так и АлАТ. При вирусном гепатите (см. Гепатиты вирусные) активность АсАТ и АлАТ в сыворотке крови увеличивается, тогда как при механической желтухе, например при желчнокаменной болезни (Желчнокаменная болезнь), активность этих А. в сыворотке крови остается в пределах нормы. Т.о., определение в крови активности АсАТ и АлАТ может использоваться наряду с клиническими признаками для дифференциальной диагностики вирусного гепатита и желчнокаменной болезни. Особенно информативно определение активности АлАТ для ранней диагностики гепатита, поскольку активность АлАТ в сыворотке крови начинает увеличиваться уже в продромальной стадии болезни, когда другие ее признаки еще не определились. Отношение активности АсАТ/АлАТ (коэффициент де Ритиса) в это время становится меньше 1. При тяжелом поражении печени отношение активностей этих ферментов меняется.

В СССР определение активностей АсАТ и АлАТ осуществляют с помощью так называемого оптимизированного оптического теста, основанного на различии спектров поглощения окисленной и восстановленной форм кофермента НАД при длине волны 340 нм. Активность АсАТ в негемолизированной сыворотке крови определяют с использованием субстратно-буферного раствора, содержащего 0,25 моль/л L-аспарагиновой кислоты в 0,1 моль/л фосфатном буфере (рН 7,4). Используемый для определения активности АлАТ субстратно-буферный раствор содержит 0,63 моль/л L-аланина в 0,1 моль/л фосфатном буфере (рН 7,4).

В норме активность АсАТ и АлАТ при 30 колеблется в пределах от 30 до 420 нмоль/(сл), или от 2 до 25 ME. Международная единица (ME) соответствует 1 мкмоль/(минл), или 16,67 нмоль/(сл).

Унифицированным методом определения АсАТ и АлАТ в СССР признан также динитрофенилгидразиновый метод Райтмана — Френкеля, основанный на том, что продукты реакций, катализируемых АсАт и АлАТ (щавелевоуксусная и пировиноградная кислоты соответственно), при взаимодействии с 2,4-динитрофенил-гидразином в щелочной среде образуют окрашенные гидразоны. Интенсивность окраски, измеренная при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см, пропорциональна активности фермента. Нормальные величины активности АсАТ и АлАТ в крови, определенные методом Райтмана — Френкеля, равны 28—190 нмоль/(сл), или 0,1—0,68мкмоль/(чмл) при 37°.

Аминотрансфера́зы (трансаминазы) — ферменты из группы трансфераз, катализирующие перенос аминогрупп от аминокислот на кетокислоты без образования свободногоаммиака. Эти реакции трансаминирования осуществляют связь между белковым и углеводным обменом. Аминотрансферазы также называют трансаминазами, а реакцию —трансаминированием. Ферменты относятся к подклассу КФ 2.6.

Для аминотрансфераз донором аминогрупп являются аминокислоты, а акцептором — кетокислоты:

AK1 + KK2 ↔ KK1 + AK2

Общая реакция трансаминирования

В составе простетической группы аминотрансферазы содержат производные витамина B6. Во время переноса аминогруппы простетическая группа переходит из пиридоксаль-5-фосфатной формы в пиридосамино-5-фосфатную форму.

Механизм реакции трансаминирования открыт в 1937 году советскими учеными А.Е. Браунштейном и М.Г.Крицман.

Процесс протекает в две стадии.

Альдегидная группа пиридоксальфосфата (-СНО) взаимодействует с аминогруппой аминокислоты с образованием иминной связи в основании Шиффа: сначала α-аминогруппа аминокислоты-донора замещает ε-аминогруппу апофермента, а затем происходит перегруппировка через кетимин и в результате гидролиза образуется пиридосамино-5-фосфат и α-кетокислота.

Реакции повторяются в обратном порядке

Аминотрансферазы являются каталитически совершенными ферментами.

Аминотрансферазы содержатся практически во всех органах, но наиболее активно реакции трансаминирования идут в печени.

К этой группе ферментов относятся такие важные для клинической лабораторной диагностики ферменты, как АСТ и АЛТ.

AK1 + KK2 ↔ KK1 + AK2

Добавить комментарий